Microscópio Óptico Composto
10.º ano
O Microscópio óptico composto é um instrumento utilizado para ampliar e observar estruturas pequenas dificilmente visíveis ou invisíveis a olho nu.
O M.O.C. é constituído por uma componente mecânica que suporta/estabiliza e permite controlar uma componente óptica que amplia as imagens. Cada parte engloba uma série de componentes constituintes do microscópio.
Ampliação total= Ampliação objetiva x Ampliação ocular
Poder de resolução: é a capacidade que os instrumentos ópticos têm de formarem imagens distintas de pontos situados próximos uns dos outros. A distância mínima a que devem estar esses dois pontos para que sejam observados separadamente designa-se por limite de resolução. Quanto maior for a ampliação utilizada, menor a área observada.
Profundidade de campo do MOC - Variação que se pode introduzir na distância frontal de uma objetiva por meio de movimento micrométrico, sem afetar a nitidez da imagem focada.
Parte mecânica
A parte mecânica do MOC é constituída pelo tubo/canhão; revólver; braço; pela platina; por um parafuso macrométrico e micrométrico e pelo pé/base.
Tubo/canhão- suporta a ocular na extremidade superior;
Revólver- suporta duas a quatro objetivas de diferentes ampliações: por rotação é possível trocar a lente objetiva;
Braço- peça fixa à base que serve de suporte às lentes e à platina;
Platina- peça onde se coloca a preparação a observar, possuindo no centro um orifício circular ou alongado que possibilita a passagem dos raios luminosos concentrados pelo condensador. As pinças ajudam à fixação da preparação;
Parafuso macrométrico- permite movimentos verticais da grande amplitude da platina;
Parafuso micrométrico- permite movimentos verticais lentos de pequena amplitude da platina para focagem precisa da imagem;
Pé/base- suporta o microscópio, assegurando a sua estabilidade.
Parte Óptica
A parte óptica do MOC é composta por objetivas; oculares; uma fonte de luz; um diafragma e condensador.
Objetivas- ampliam a imagem do objeto a ser observado, através do sistema de lentes que a compõem. É a lente que fica mais próxima do objeto a observar. As objetivas tem uma ampliação geralmente de 10x, 40x e 100x;
Oculares- capta a imagem ampliada pela objetiva, ampliandoa, através do seu sistema de lentes e permite a sua observação pelo olho humano. As oculares mais usadas são as de ampliação 10X;
Fonte de luz-existem vários tipos de fontes de luz, podendo ser uma lâmpada incluída no próprio microscópio com um interruptor (iluminação artificial), ou um espelho que reflita a luz solar (iluminação natural);
Diafragma- Regula a quantidade de luz que atinge o campo de visão do microscópio, através de uma abertura que abre ou fecha em diâmetro;
Condensador- Sistema de duas lentes (ou mais) convergentes que orientam e distribuem a luz emitida de forma igual pelo campo de visão do microscópio.
Características da imagem do microscópio
A imagem do MOC surge ampliada (1º pela objetiva e depois pela ocular), duplamente invertida e virtual.
Montagem de uma preparação
As preparações microscópicas podem ser:
Preparações temporárias (para observações momentâneas)
Preparações definitivas (observações duradouras)
Estas preparações são conservadas no meio de montagem, normalmente em meio líquido. Este pode ser:
- Água;
- Soro fisiológico (solução salina isotónica para células animais);
- Solução de Ringer (solução salina isotónica para células vegetais);
- Meio aquoso onde se encontram as células.
Técnicas de microscopia
Técnicas de coloração
- Imersão - Usando o corante como meio de montagem;
- Irrigação - Colocando a gota do corante junto a uma das bordas da lamela e aspirando-o do lado oposto, com um papel de filtro.
Técnica de esmagamento
Técnica utilizada nos casos em que existe uma aderência fraca entre as células do tecido a observar. Para visualizar as células, basta colocar um pequeno fragmento do tecido entre a lâmina e a lamela e fazer uma pequena pressão com o polegar. Provoca-se, desta forma, um esmagamento do tecido, o que faz com que as células se espalhem, formando uma fina camada, que é facilmente atravessada pela luz.
Técnica do esfregaço
Esta técnica permite a separação de células em meio líquido. Consiste em espalhar um fragmento de tecido ou uma colónia sobre uma lâmina de vidro, o que provoca a dissociação de alguns elementos celulares e a sua aderência ao vidro. Desta maneira forma-se uma camada fina de células, facilitando a observação.
Técnica dos cortes finos
Na microscopia ótica os cortes devem ser finos, rondando os poucos micrómetros, o que é conseguido pela utilização de micrótomos com lâminas metálicas.
Consiste em cortar o material biológico em camadas finas camadas, suscetíveis de serem atravessadas por raios luminosos. Os cortes, em materiais de dureza média, podem efetuar-se usando um bisturi, uma lâmina de barbear ou um micrótomo de Ranvier.Os tecidos pouco consistentes dificultam a obtenção de cortes finos pelo que se torna necessário endurecer, previamente o material, por congelação ou inclusão.
Cuidados a ter com o MOC
- O microscópio deve ser colocado sempre afastado dos bordos da mesa de trabalho;
- Sobre a mesa de trabalho, do lado oposto aquele em que se coloca o microscópio, deve ficar apenas o material necessário para registar o que se vai observar;
- Descer a platina e retirar a preparação;
- Colocar a objectiva de menor ampliação no prolongamento do tubo;
- Verificar se o microscópio se encontra perfeitamente limpo;
- Quando for necessário transportar o microscópio, deverá segurar-se com ambas as mãos (uma sob a base e outra a segurar o braço);
- Caso esteja muito próxima à platina, subir o canhão, empregando o parafuso macrométrico. Colocar a preparação (lâmina) sobre a platina. Olhando por fora do aparelho, baixa-se à objetiva bem próxima à preparação. Em seguida, olhando pela ocular e empregando o parafuso macrométrico, sobe-se o canhão até observar uma imagem mais ou menos nítida. Por fim, utilizando-se o parafuso micrométrico, faz-se à localização fina. Deve-se manter o parafuso micrométrico próximo a metade do seu curso a fim de permitir movimentos livres para cima e para baixo;
- Evitar molhá-lo nas preparações temporárias;
- Após a utilização, encaixar a objectiva de menor ampliação alinhada com a ocular;
- Com o parafuso macrométrico, ajustar a platina para a posição mais próxima da objectiva. Descê-la lentamente, de modo a obter a primeira imagem.